本工具是一款专业的 Smad3蛋白互作与PUP-IT分析助手, 专注于 PUP-IT技术 稳转细胞系构建 生物素标记 等实验设计。 通过智能算法分析实验需求,自动生成符合分子生物学规范的 实验操作流程, 显著提升您的 科研效率。
利用原核泛素样蛋白(Pup)及其连接酶(PafA)在邻近蛋白上标记生物素,实现活细胞内蛋白互作网络的捕获。
需设计包含PupE-Smad3融合蛋白的慢病毒载体,通过病毒感染目的细胞并利用抗性药物筛选单克隆稳转株。
建议优化生物素浓度、孵育时间以及PafA酶的表达量,以获得最佳的标记效果和最低的背景噪音。
PUP-IT技术适用于大多数哺乳动物细胞系,特别是HEK293T、HeLa等易于转染和感染的细胞。